原代培养中细胞传多少代 (原代细胞转染)

原代培养中细胞传多少代?

原代细胞是指从机体上分离得到的细胞，原代细胞可以传代，但传代数一般不超过10代，而原代的神经细胞是不能传代的(神经细胞是不能分裂的)。

经验总结:细胞转染那些事儿

如果在转染前一天或更早时间铺板，转染效率可能下降，如果是简单细胞系的转染，可以直接在前一天晚上铺板，第二天来转染。

阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成 DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。

细胞接种：一般做转染前一天接种/铺板（细胞计数大约5*10^4cell/ml），使做转染前细胞密度在30-50%。为了能在使用时有较好的转染效果，之一次使用建议您用24孔板做，每孔2ul转染试剂即可。

转染试剂的准备① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。② 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体 体积：DNA质量)来转染细胞。

病毒转染的原理

1、JetPrime转染的原理是利用高速离心机将DNA和阳离子脂质体结合，从而将DNA导入细胞。具体来说，JetPrime阳离子脂质体与DNA通过电荷相互作用形成阳离子复合物，然后通过内吞作用进入细胞。

2、无论是转染还是转化，其关键因素都是用氯化钙处理大肠杆菌细胞，以提高细胞膜的通透性，从而使外源DNA分子能够容易进入细胞内部。

3、利用HIV病毒将自身基因组插入整合到宿主基因组的特性。在293T细胞内先转染三个质粒，分别为HIV病毒合成所需要的组分（改造过的），其中一个带有装配入病毒衣壳信号序列的质粒上插入要稳转的序列。

4、侵染和转染的区别如下，转染Transfection ：是指重组质粒载体或游离核苷酸在脂质体等介导下进入真核细胞。侵染是细菌、病毒等进入并感染机体的过程。

原代的细胞到底能不能够构建稳定的细胞株呢?

1、对于人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。

2、构建稳定细胞株有两种主要方式，一种是使用病毒载体介导的基因递送，另一种是利用质粒转染。使用病毒介导的基因递送通常会导致细胞的死亡或转化，因此它不适用于需要形成稳定表达的蛋白质的应用。

3、原代比较容易，因为转化过的细胞系存在不稳定性，而克隆势必会对细胞产生一定的影响，容易导致细胞变性或死亡，原代就比较稳定，容易克隆。

4、因此原代培养细胞的部分生物学特征尚不够稳定，在进行较为严格的对比性实验研究时，还需先对细胞进行短期传代。近年来，原代培养技术已被广泛应用于中医药研究尤其是中药研究之中。

5、由此可见，细胞代数与增殖代数相关，确切的代数则依赖于细胞株和培养条件的不同而异。但构成一个细胞系的生长条件必须是同样的，因而细胞系应该表达近似的增殖代数或倍增代数。

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